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上海凱創(chuàng)生物技術(shù)有限公司

沙眼衣原體的實(shí)驗(yàn)室檢查

更新時(shí)間:2020-03-02 12:02:35  推薦指數(shù):

  沙眼衣原體的實(shí)驗(yàn)室檢查包括病原學(xué)方法和非病原學(xué)方法。病原學(xué)方法包括衣原體直接鏡檢、衣原體培養(yǎng)、衣原體抗原檢測(cè)(免疫層析法、酶聯(lián)免疫法和直接免疫熒光法)、衣原體核酸檢測(cè)(包括核酸探針雜交和PCR);非病原學(xué)方法包括衣原體抗體檢測(cè)(用衣原體抗原檢測(cè)血中特異的衣原體抗體)、組織病理和尿白細(xì)胞計(jì)數(shù)。本篇內(nèi)容主要介紹分離培養(yǎng)與鑒定、藥敏試驗(yàn)、抗體檢測(cè)。

  一、分離培養(yǎng)與鑒定 細(xì)胞培養(yǎng)法用于分離培養(yǎng)衣原體,敏感性70%~90%,特異性達(dá)99%,此法對(duì)技術(shù)和設(shè)備要求較高且費(fèi)用昂貴,培養(yǎng)有一定難度,也可能出現(xiàn)假陰性。因此不適合大樣本病例。

  1、雞胚分離培養(yǎng)

  1907年捷克學(xué)者Harberstaedter和von Prowazek發(fā)現(xiàn)衣原體開(kāi)始,各國(guó)學(xué)者都致力于衣原體的分離純化,但半個(gè)世紀(jì)內(nèi),由于有可能將某些發(fā)光顆粒(白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、色素顆粒)、細(xì)菌和酵母菌誤認(rèn)為沙眼衣原體,因此此法對(duì)于實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)水平要求較高。以后,我國(guó)著名微生物學(xué)家湯飛凡教授用雞胚分離的經(jīng)典方法首次分離成功,從而將衣原體的研究推向了新的高潮。卵黃囊培養(yǎng)對(duì)衣原體的早期分離功不可沒(méi),但陽(yáng)性率低,自有細(xì)胞培養(yǎng)后,臨床基本不再使用。

  2、細(xì)胞分離培養(yǎng)

  C.t是專(zhuān)性的細(xì)胞內(nèi)寄生物,它只能在細(xì)胞中生長(zhǎng),McCoy細(xì)胞(小鼠成纖維瘤細(xì)胞)提供了衣原體生長(zhǎng)繁殖的必備條件,因此,常用它來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)和檢測(cè)。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)法陰性標(biāo)本盲傳一代后仍為陰性,即確診為陰性。然而有研究報(bào)道在一些有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室,增加傳代培養(yǎng)的次數(shù)會(huì)明顯提高沙眼衣原體泌尿生殖道感染的檢出率。目前,單層細(xì)胞和培養(yǎng)基均有商品供應(yīng),雖費(fèi)用較高,但很容易獲得,另外常用的還有HeLa229細(xì)胞、BHK21細(xì)胞、MCF7,HaCaT細(xì)胞和HL細(xì)胞株等。細(xì)胞培養(yǎng)法一直是沙眼衣原體實(shí)驗(yàn)室檢查的金標(biāo)準(zhǔn),然而由于敏感性相對(duì)較低,不同實(shí)驗(yàn)室檢出的陽(yáng)性率差別較大,而且耗時(shí)、費(fèi)錢(qián),需要一定的實(shí)驗(yàn)設(shè)備,不適用于臨床門(mén)診中大量患者的實(shí)驗(yàn)室檢查。

  3、衣原體微量快速培養(yǎng)法

  很多學(xué)者對(duì)衣原體細(xì)胞培養(yǎng)方法做了改進(jìn),細(xì)胞培養(yǎng)由玻璃瓶改為試管,由試管改為微量快速的96孔板,同時(shí)也有改為適用于一般實(shí)驗(yàn)室的平皿法。

  二、藥敏試驗(yàn)

  日本化學(xué)療法學(xué)會(huì)1992年建立的衣原體最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定方法是參照衣原體屬?lài)?guó)際通用的測(cè)定法而制定的標(biāo)準(zhǔn)法,在我國(guó)尚未建立衣原體的藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)法。

  三、抗體檢測(cè)

  人體感染衣原體后,產(chǎn)生相應(yīng)抗衣原體抗體,檢測(cè)這些特異性抗體可確定有無(wú)衣原體感染。檢測(cè)血清抗體不同種類(lèi)的臨床意義也不盡相同??挂略wIgM抗體在成人生殖道感染并不常見(jiàn);抗衣原體IgG抗體陽(yáng)性率在性活躍人群高,盡管可以無(wú)活動(dòng)性感染,既往感染足以引起陽(yáng)性;而衣原體特異性血清IgA抗體則與疾病活動(dòng)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。用于各型衣原體感染的血清學(xué)試驗(yàn)包括補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、微量免疫熒光試驗(yàn)、間接免疫熒光和酶免疫吸附試驗(yàn)等。微量免疫熒光試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)常用。血清學(xué)方法對(duì)診斷生殖道衣原體感染的合并癥有意義?;驾斅压苎谆蚋沃?chē)椎呐曰蚧几讲G炎的男性患者血清抗體滴度非常高。此外,用酶免疫法測(cè)定衣原體抗體和微量免疫熒光法一樣敏感,但不能用于新近感染。

  血清學(xué)試驗(yàn)的診斷價(jià)值有局限性:①到目前為止還沒(méi)有一種試驗(yàn)?zāi)芡耆m用于所有種類(lèi)衣原體感染;②由于感染早期癥狀較輕微,往往錯(cuò)過(guò)急性期標(biāo)本的采集時(shí)間;③由于血清抗體可持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間,單一血清標(biāo)本檢測(cè)到的抗體只能說(shuō)明以前感染過(guò)衣原體,只有當(dāng)恢復(fù)期血清抗體與急性期抗體相比滴度有4倍增高并伴有臨床癥狀時(shí)才支持目前有衣原體感染。由于敏感性、特異性、預(yù)測(cè)值不夠理想,血清學(xué)檢查不建議作為臨床診斷疾病的活動(dòng)性的手段。

  目前沒(méi)有一個(gè)同時(shí)具備快速、特異性、敏感、價(jià)廉等特點(diǎn)的檢測(cè),再加上沙眼衣原體泌尿生殖道感染臨床表現(xiàn)隱匿,及時(shí)診治變得很困難。目前的檢測(cè)標(biāo)本采集主要是尿道和生殖道分泌物(表1、表2),而近年很多研究提示,衣原體感染的胃腸道定植可能是衣原體感染復(fù)發(fā)的重要原因,衣原體感染標(biāo)本采集的困難也是衣原體診治難點(diǎn)之一。

沙眼衣原體檢測(cè)試劑
沙眼衣原體檢測(cè)試劑

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